Nghệ sĩ Mỹ Thu tên thật là Nguyễn Thị Mỹ Thu, sinh ngày 19-11-1960, tại Tỉnh Đồng Nai.

Vốn yêu thích cổ nhạc từ nhỏ nên vào năm 1974 lúc đó Mỹ Thu 14 tuổi trong thời gian học may trong những tháng nghỉ hè, cô được người chị của mình đến học ca cổ nhạc với thầy nhạc sĩ Út Trong. Sau đó, cô trở về học văn hóa tuy nhiên vì chiến tranh nên việc học văn hóa của cô bị bỏ dở, từ đó cô ở nhà phụ giúp cha mẹ trong công việc buôn bán. Cô vẫn mong muốn được theo đuổi niềm đam mê ca hát của mình mặc dù không được gia đình ủng hộ.

Năm 1976, cô được người chị bà con giới thiệu vào gánh hát Kim Dung và được ông bầu chấp nhận cho vào gánh hát học hát có lương đêm và dạy nghề hát cho cô. Từ đó, cô theo đoàn hát Kim Dung và nhận nghệ sĩ Minh Chí làm thầy dạy hát. Với giọng ca của mình cùng với sự sáng dạ cô nhanh chóng trở thành một diễn viên chuyên nghiệp trên sân khấu, cô được khán giả cũng như các nghệ sĩ trong đoàn nhiệt liệt khen ngợi. Trong một thời gian ngắn, cô nhanh chóng trở thành đào nhì của gánh hát và nổi tiếng nhanh chóng trong số các nghệ sĩ trẻ của các đoàn tỉnh lúc bấy giờ.

Năm 1977, cô được ông bầu đoàn hát Hậu Giang 3 mời về đoàn hát chánh qua các vai diễn thành công như vai Ái Trinh tuồng Ngọc Ẩn Rừng Thiêng, vai Tấm tuồng Tấm Cám, vai Lài tuồng Tiếng Hò Sông Hậu. Sau đó, cô cũng có thời gian hát chánh cho các đoàn khác như đoàn Bông Hồng Vàng năm 1979, đoàn Cao Văn Lầu năm 1981, đoàn Đồng Nai năm 1982 hát chung cùng với các nghệ sĩ tài danh như Hoài Thanh, Đỗ Quyên, Ngân Tuấn, Phương Hồng Thủy, Tuấn Minh, Vương Minh, Bích Ngọc, Lan Ngọc…

Đặc biệt trong năm 1985, cô đã có 4 vai diễn thành công nhận được sự hưởng ứng nhiệt liệt của khán giả đó là vai Tô Lan trong tuồng Công Chúa Tô Lan, vai Thứ Phi trong tuồng Thứ Phi và Hoàng Hậu, vai Hạnh trong tuồng Tấm Áo Ân Tình, và vai Nga trong tuồng Lá Sầu Riêng. Năm 1990, cùng với công tác với đoàn hát Long An 2 cô còn được nghệ sĩ Út Bạch Lan dạy hát qua một số vai tuồng như Trà Hoa Nữ, Chiều Đông Gió Lạnh Về, Người Điên Trên Sông Lạnh.

Năm 1993, cô về hát chánh cho đoàn hát Nhạn Trắng tỉnh Bình Thuận, cũng trong năm đó cô đã xuất sắc nhận Huy chương vàng giải Trần Hữu Trang với số điểm cao nhất 591 điểm trong số 5 huy chương vàng được tặng thưởng, gồm có: Mỹ Thu, Châu Thanh, Linh Tâm, Linh Châu và Linh Huệ.

Sau hơn 30 năm cống hiến cho nghệ thuật sân khấu cải lương, nghệ sĩ Mỹ Thu đã đi hát cho nhiều đoàn hát và cũng là người đi lưu diễn ở nhiều tỉnh khác nhau, mỗi lần qua điểm diễn là nghệ sĩ nhận được nhiều tình cảm cũng như lời khen ngợi của khán giả.

Về cuộc sống gia đình, Mỹ Thu là con Út trong gia đình có bốn anh chị em và chỉ có Mỹ Thu là theo nghề ca hát; cha mẹ của cô làm kinh doanh. Mỹ Thu đã từng lập gia đình nhưng đã chia tay, cô có một người con gái, sau khi cuộc hôn nhân tan vỡ cô ở vậy nuôi con và tiếp tục theo nghề hát cho tới bây giờ.